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标准载量苯基疏水色谱柱料，高载量苯基疏水色谱柱料和丁基疏水色谱柱料是疏水相互作用色谱(HIC)的介质。取决于不带电荷基质的疏水基团的疏水相互作用强度不同进行物质分离。Beadose Fast FlowHIC介质属于色谱柱介质家族，它们具有高品质、高批次重复性的特点，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质和多肽的分离纯化。本制品均可耐受较高的流速及更高的化学稳定性，适合实验室及工业大规模纯化。这使得它们成为从过程开发，扩大，生产到操作的所有阶段的理想选择。不同介质的特性如下。

填料	丁基疏水色谱柱料	标准载量苯基疏水色谱柱料	高载量苯基疏水色谱柱料
产品编号	GS4370	GS4371	GS4372
配体密度	40 μmol/mL	25 μmol/mL	40 μmol/mL
结合能力	约7mg IgG/mL	约10mg IgG/mL 24mg HAS/mL	约30mg IgG/mL 36mg HAS/mL
粒度范围	90μm(45～165μm)
压力/流速	300cm/h	300～600cm/h	300～600cm/h
基质	4%高度交联琼脂糖	6%高度交联琼脂糖
pH稳定性	2~14(短期)3~13(长期)
储存缓冲液	20%乙醇
化学稳定性	1M NaOH，1mM HCl，70%乙醇，30%异丙醇，6M盐酸胍
储存温度	2～8℃不可冻存

组分	25mL	100mL
丁基疏水色谱柱料	25mL	100mL
说明书	1份	1份

保存：2～8℃，不可冻存

• 所需材料：
  所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
  Binding/Wash Buffer：0.05M磷酸盐，1.7M硫酸铵，pH7.0
  Elution Buffer：0.05M磷酸盐，pH7.0
  可根据不同介质及纯化物质不同做适当改变，原则上疏水层析介质是高盐上样低盐洗脱。
  
• 样品准备：
  样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
  样品中盐浓度与Binding/Wash Buffer相同，一般为0.5~2.0M硫酸铵。
  
• 样品纯化：
  
  • 孵育法纯化
    
    • 根据所需纯化样品量，取适量疏水层析介质加入离心管中，1000rpm离心1min，弃上清。
      
    • 向离心管中加入5倍介质体积的Binding/Wash Buffer清洗介质，1000rpm离心1min，弃上清。
      
    • 加入样品，将离心管盖紧，4℃振荡孵育2~4h或37℃孵育30min~2h。
      
    • 待孵育结束后，1000rpm离心1min，保留上清作为流穿液进行后续电泳验证。
      
    • 用5倍介质体积的Binding/Wash Buffer清洗介质，1000rpm离心1min，保留上清(注意不要吸到介质)，重复3～5次，中间建议更换离心管，作为洗杂液用于后续电泳验证。
      
    • 加入3～5倍介质体积的Elution Buffer进行洗脱，室温孵育10～15min，1000rpm离心1min，可重复2～3次，收集上清为蛋白洗脱组分用于后续电泳验证。
  • 重力柱纯化法
    
    • 将装填好的重力柱介质用5倍柱体积的Binding/Wash Buffer进行平衡，使得填料与目的蛋白处于相同缓冲液下，重复2～3次。
      
    • 将样品加入平衡好的重力柱中，样品至少在柱中停留2min以上，保证样品与介质的充分接触，收集流穿液，用于后续电泳验证。
      
    • 用10～15倍柱体积的Binding/Wash Buffer进行洗杂，去除非特异结合蛋白，收集洗杂液用于后续电泳验证。
      
    • 使用5～10倍柱体积的Elution Buffer进行洗脱，分段收集，每一个柱体积收集一管，分别检测，既可以保证所有目的蛋白被洗脱，也可以得到高纯度及高浓度的蛋白。
• SDS-PAGE检测：
  将使用纯化产品得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品用SDS-PAGE检测纯化效果。

疏水层析介质每次使用后可以分别用2～3倍柱体积的30%异丙醇，3倍柱体积的去离子水清洗，然后用至少3倍柱体积的Binding/Wash Buffer进行平衡。
在位清洗(CIP)：
疏水层析介质可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。
去除一些沉淀或变性物质，建议使用下面的方法：
用2倍柱体积的1M NaOH溶液进行清洗(至少浸泡4h)，然后用3～4倍柱体积的去离子水清洗，最后用至少3倍柱体积的Binding/Wash Buffer进行平衡。
去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质：
用3～4倍柱体积的70%乙醇或3～4倍柱体积含有1% Triton X-100的0.1M醋酸盐清洗(至少浸泡1~2h)，用3～4倍柱体积的去离子水清洗，然后用至少3倍柱体积的Binding/Wash Buffer进行平衡。
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